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IMCD3 小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細(xì)胞
更新時(shí)間:2020-07-01 點(diǎn)擊量:2311

IMCD3 小鼠腎臟內(nèi)髓集合管3上皮細(xì)胞

Product Format: a T25 flask

Culture Properties貼壁

Complete Growth Medium: 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

Application:  Cells and cancer research

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

 

Components  

Item

Specifications

a T25 flask

2X106

Manual

1 copy

 

Operation steps for cell culture

  • 吸走多余培養(yǎng)基,加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤洗細(xì)胞;
  • 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細(xì)胞表面,培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化;
    (細(xì)胞對于消化比較敏感,消化過度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài),導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落,可以輕輕吹下時(shí)即可終止,禁止消化到細(xì)胞*漂浮。混勻細(xì)胞時(shí)盡量輕柔,不要吹出大量氣泡。)
  • 加入6-8ml*培養(yǎng)基終止消化,輕輕吹下細(xì)胞混勻;
  • 將混勻的細(xì)胞1000rpm(約150g)離心3min,棄上清,再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng);

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一,具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定,大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代,生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

1.凍存液:92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇)

2.降溫步驟:4度10min,-20度2h,-80過夜后液氮保存。

Tips:

  • 細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后,部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞si亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞,再900-1000rpm(約150g)離心3min,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時(shí)碎片比較少,傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗次。
  • 細(xì)胞生長不均時(shí),可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
  • 細(xì)胞生長緩慢時(shí),可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)(gao不超過20%),也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài),選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

不同細(xì)胞貼壁性差異比較大,所以消化時(shí)間差別較大,20s-10min均有可能,具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落,并可以輕輕吹下為準(zhǔn),嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。

 

 

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